Bước trong quy trình tạo dòng DNA tái tổ hợp | Loại enzyme được sử dụng | Vai trò xúc tác của enzyme |
Bước (1): Tách chiết hoặc tổng hợp DNA đích | Enzyme lysozyme, cellulase, protease | Có tác dụng phá vỡ thành, màng tế bào để thu vật liệu di truyền |
Enzyme DNA polymerase | Dùng để xúc tác quá trình lắp các nucleotide vào mạch DNA trong tổng hợp hóa học hoặc nhân DNA bằng PCR. | |
Bước (2): Cắt giới hạn vector (thể truyền) và DNA đích bằng cùng 1 loại enzyme | Enzyme cắt giới hạn restriction | Có tác dụng cắt DNA tại những đoạn trình tự nhất định mà chúng nhận biết |
Bước (3): Ghép nối vector và đoạn DNA đích đã được cắt giới hạn bằng enzyme nối để tạo DNA tái tổ hợp | Enzyme nối ligase | Có tác dụng nối đoạn DNA đích vào vector chuyển gen để tạo DNA tái tổ hợp |
Bước (5): Sàng lọc, tuyển chọn dòng tế bào chủ mang vector tái tổ hợp | Enzyme beta – galactosidase | Sàng lọc, tuyển chọn dòng tế bào chủ mang vector tái tổ hợp |