Lấy lá của hai cây đem nghiền trong dung dịch đệm thích hợp để tách chiết enzim ra khỏi lá. Sau đó cho một lượng nhất định axit glycolic vào mỗi dịch chiết.

- Sau một thời gian xác định, nếu hàm lượng axit này không đổi thì dịch chiết không có mặt enzim glycolat oxidaza, vậy dịch chiết đó lấy từ cây C₄.

- Nếu hàm lượng axit glycolic giảm thì dịch chiết đó có enzim glycolat oxidaza, dịch chiết này là của cây C₃.

Giải thích thí nghiệm:

- Enzim glycolat oxidaza chỉ có mặt trong thực vật C₃. Do đó nếu phát hiện enzim này có mặt ở thực vật nào thì đó là cây C₃.

Phản ứng: axit glycolic + Oxi " glicolat + H₂O₂ (enzim xúc tác glycolat oxidaza) (đồng thời cũng tạo thành H₂O₂, sau đó H₂O₂ bị phân hủy bởi catalase tạo thành H₂O và O₂)

Phản ứng này xảy ra tại peroxisome trong quá trình hô hấp sáng.

Lấy lá của hai cây đem nghiền trong dung dịch đệm thích hợp để tách chiết enzim ra khỏi lá. Sau đó cho một lượng nhất định axit glycolic vào mỗi dịch chiết.

- Sau một thời gian xác định, nếu hàm lượng axit này không đổi thì dịch chiết không có mặt enzim glycolat oxidaza, vậy dịch chiết đó lấy từ cây C₄.

- Nếu hàm lượng axit glycolic giảm thì dịch chiết đó có enzim glycolat oxidaza, dịch chiết này là của cây C₃.

Giải thích thí nghiệm:

- Enzim glycolat oxidaza chỉ có mặt trong thực vật C₃. Do đó nếu phát hiện enzim này có mặt ở thực vật nào thì đó là cây C₃.

Phản ứng: axit glycolic + Oxi " glicolat + H₂O₂ (enzim xúc tác glycolat oxidaza) (đồng thời cũng tạo thành H₂O₂, sau đó H₂O₂ bị phân hủy bởi catalase tạo thành H₂O và O₂)

Phản ứng này xảy ra tại peroxisome trong quá trình hô hấp sáng.